Vidokezo vya msingi vya uhifadhi wa tamaduni za seli

Vidokezo vya msingi vya uhifadhi wa tamaduni za seli

Seli zinaendelea kimetaboliki yao wakati wa shughuli za ukuaji wa kawaida, ambayo inahitaji ushiriki wa protini anuwai. Wakati joto linashuka chini -70 ° C, protini zinaacha kufanya kazi. Kwa hivyo, katika mazingira yenye joto la chini sana, seli zinaweza kusimamisha shughuli zao za kimetaboliki na kuingia katika hali mbaya ambayo inaruhusu uhifadhi wa muda mrefu.

1. Vifaa vya majaribio

Vifaa vya msingi:

Utamaduni wa msingi wa kati

Serum (kawaida FBS/NBS)

Ultrapure Workbench

Storile dimethyl sulfoxide (DMSO)

Storile PBS phosphate buffer chumvi suluhisho

Bunduki ya bomba

Bunduki ya bomba la umeme

Maandalizi ya majaribio

a) Maandalizi ya suluhisho la kufungia:

Seli za Jumla: 55% basal kati + 40% bovine serum (FBS/NBS) + 5% DMSO

Seli muhimu: 90% bovine serum (FBS/NBS) + 10% DMSO

Aliquot Suluhisho la kutuliza lililoandaliwa ndani ya bomba la sentimita 15 [kiota] na uhifadhi kwa 4 ° C kwa matumizi ya baadaye.

(b) Maandalizi ya seli zilizohifadhiwa:

Kabla ya kufungia seli, chagua seli zilizo na hali nzuri ya ukuaji na katika awamu ya ukuaji wa logarithmic na ubadilishe na masaa safi ya kati ya 12-24 kabla ya kufungia ili kudumisha hali ya seli.

2. Utaratibu wa majaribio

1. Angalia wiani wa seli kuwa waliohifadhiwa, ambayo ni karibu 80%~ 90%. Tumia bunduki ya bomba kutamani kati ya zamani, ongeza PBS yenye kuzaa kuosha seli mara 1-2, na uondoe kati iliyobaki katika mazingira ya utamaduni.

2. Ongeza kiwango kinachofaa cha trypsin au juisi ya utumbo ili kuruhusu trypsin kuingia kwenye seli, na kuziweka kwenye incubator kwa digestion. Angalia hali ya seli zilizo chini ya darubini: cytoplasm inarudisha nyuma na seli hazijaunganishwa tena kwenye shuka. Katika hatua hii, ongeza suluhisho la kusimamisha ili kuzuia mchakato wa digestion.

3. Kwa upole chembe za seli na ncha kuunda kusimamishwa kwa seli na centrifuge kusimamishwa kwa seli saa 1000 rpm kwa dakika 3-5.

Tupa supernatant, ongeza kiwango sahihi cha suluhisho la kufungia, na pipette upole kufanya seli kuhesabu sawasawa. Rekebisha wiani wa seli na kati ya cryopreservation kufanya wiani wa mwisho 5 × 106/ml ~ 1 × 107/ml.

4. Tumia bunduki ya bomba kutenganisha zilizopo za cryogenic kulingana na uwezo unaotarajiwa, na utumie mashine ya kutengeneza moja kwa moja kuweka na muhuri.

. 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (mara moja) → uhifadhi wa muda mrefu katika nitrojeni kioevu.

Inaweza pia kuhifadhiwa moja kwa moja kwenye freezer kwa -80 ° C mara moja na kisha kuhamishiwa nitrojeni kioevu kwa uhifadhi.

Yongyue Medical ni biashara ya hali ya juu inayo utaalam katika R&D, uzalishaji na uuzaji wa matumizi ya biomedical. Vidokezo vya bomba, bomba, sahani ya PCR, bidhaa za utamaduni wa seli na matumizi mengine ya maabara ya kibaolojia. Matibabu ya Yongyue inastahili kuaminiwa na chaguo lako! Karibu kwa kushauriana!